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SARS-CoV-2 假病毒

SARS-CoV-2 假病


假病毒描述:

SARS-CoV-2假病毒以HIV病毒为骨架,外面包被SARS-Cov-2Spike 蛋白,能够感染过表达人ACE2的细胞。可用于测试研究阻断病毒侵入的中和抗体或其它药物。假病毒只能单次感染,不能复制,安全性高,可在P2级实验室使用。

 

假病毒参数:

产品名称

SARS-CoV-2 假病毒

货号

VS-SC-0001

荧光基团

eGFPLuciferase

生物安全防护措施

P2级实验室

包装

100~200ul

感染滴度

2×105 TU*(基于hACE2-COS7细胞)

拷贝数

108

保存

-80

* TUtransfection unit),1TU=使1个细胞发出绿色荧光。

 

假病毒制备:

维通达将Spike蛋白表达质粒、包装质粒、转移质粒共转染到293T细胞内,包装出以SARS-CoV-2-Spike为表面衣壳蛋白的假病毒。假病毒同时带有Firefly LuceGFP标记,可以通过有Firefly LuceGFP检测感染。示意图如下:

d14abe195395274291be8f9ebc14c8e6-sz_278476.png

注意事项:

1) 病毒使用PEG8000浓缩,会有血清蛋白沉淀,外观浑浊,但不影响使用。

2) 病毒干冰运输,-80℃保存,使用前室温融化。

 

使用方法:

1. 第一天,96孔板每孔接种5×103hACE2-COS7细胞。

2. 第二天,除去培养板里的培养基,新鲜培养基(100ul/孔)与假病毒2×103 TUPolybrene混合(5ug/ml终浓度),加入培养孔,培养板离心(1200g x 2 Hour4℃)。

2×103 TU时,luciferase的亮度约为1×106)。

3. 离心感染的细胞,吸干净培养基,再用PBS洗一次;每孔加入30ul 0.25%的胰酶,37℃孵育5min,加入100ul完全培养基,继续培养。

4. 感染后继续培养3天(每天换液),进行luc检测,也可以观察eGFP荧光(根据情况更换培养基)。



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